Los estándares de turbidez de McFarland se usan como referencia en suspensiones bacteriológicas para saber que el número de bacterias por mililitro, o más bien en UFC según una escala que va de 0.5 a 10. Estos estándares son creados al mezclar soluciones de cloruro de bario al 1% con ácido sulfúrico al 1% en volúmenes específicos, para asegurar la densidad correcta se puede controlar usando espectofotometros.
Los estándares pueden ser visualmente comparados con suspensiones de bacterias en salina estéril o en caldos. Si la suspensión es demasiado turbia, puede añadirse diluyente, y si no es lo suficiente turbia, se puede agregar más bacterias. La ventaja es que no es necesario incubar ni usar equipo especial para estimar el número de bacterias
Materiales
- Tubos de ensayo
- Vaso de precipitados
- Espectrofotometro
- Gradilla
- Micropipeta
- Pipeta
- Vidrio de reloj
- Cabina de seguridad
- Agua destilada
- Probeta de 500 y 100 ml
- Balanza
- H2SO4 (0.18M)
- BaCl2 (0.048M) ml
Procedimiento
- Preparamos 500 ml de Acido sulfurico 98% a 0.18M
d= 1000/540 = 1.85
M= nº moles/ V(L) = 0.18
0.18= m x 98 / 0.5 ; m= 8.83g
1.85= 9.02/x ; x=4.87ml
2. Preparacion de 100ml de cloruro de bario 0,048M
PM BaCl2 = 208,8
PM BaCl2 x 2H2O= 208,8
0.048 = m x 205,3 /0.1; m = 0`999g
208´3---------0`999g
244`2--------- x x=1,47g
PROCEDIMIENTO
- Empezamos preparando las diluciones madre
- Primero se pipeteara el BaCl2, despues el acido sulfurico y despues se agitara
- Preparamos en la cabina de bioseguridad, despues colocamos 10ml de cada matraz en los tubos de ensayo los cuales los utilizaremos para hacer estos recuentos de forma indirecta
- Nº10: 10 ml BaCl2 + 90 ml H2SO4
- Nº9: 9 ml BaCl2 + 91 ml H2SO4
- Nº8: 8 ml BaCl2 + 92 ml H2SO4
- Nº7: 7 ml BaCl2 + 93 ml H2SO4
- Nº6: 6 ml BaCl2 + 94 ml H2SO4
- Nº5: 5 ml BaCl2 + 95 ml H2SO4
- Nº4: 4 ml BaCl2 + 96 ml H2SO4
- Nº3: 3 ml BaCl2 + 97 ml H2SO4
- Nº2: 2 ml BaCl2 + 98 ml H2SO4
- Nº1: 1 ml BaCl2 + 99 ml H2SO4
- Nº0.5: 0.5 ml BaCl2 + 99`5 ml H2SO4
Colocamos la escala de MacFarland en tubos para poder medir Visualmente
Estandar
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H2SO4 (0.18M) ml
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BaCl2
(0.048M) ml
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Nº Bacterias/ml
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0.5
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99.5
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0.5
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1.5x108
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1
|
99
|
1
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3 x108
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2
|
98
|
2
|
6 x108
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3
|
97
|
3
|
9 x108
|
4
|
96
|
4
|
1.2 x109
|
5
|
95
|
5
|
1.5 x109
|
6
|
94
|
6
|
1.8 x109
|
7
|
93
|
7
|
2.1 x109
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8
|
92
|
8
|
2.4 x109
|
9
|
91
|
9
|
2.7 x109
|
10
|
90
|
10
|
3.1 x109
|
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