Prueba de la Glucosa O/F

Fundamento

Indica del tipo de metabolismo energético: respiratorio (O) o fermentador (F). 

Se suele utilizar glucosa como sustrato. Se detecta la acumulación de ácidos con un indicador ácido-base. La bacteria se inocula por picadura  y se incuba en condiciones de aerobiosis (sin parafina)  y de anaerobiosis (con parafina, tubo cerrado). 

Las bacterias que respiran aerobiamente crecen en la superficie del medio del tubo abierto. Transforman la glucosa en CO2, la superficie del medio se verá ligeramente amarilla (por la formación de ácido carbónico originado al reaccionar el CO2 con el agua del medio). 

En un tubo cerrado el cultivo se mantiene azul-verdoso. Las bacterias fermentadoras producen ácidos a partir de la glucosa. Viran el cultivo del tubo cerrado a amarillo; en el tubo abierto se inicia el viraje en el fondo, pero transcurridas 24 horas los ácidos pueden difundir por todo el medio cambiando de color a amarillo.

Materiales

• Asa de siembra
• Dos tubos con medio Hugh – Leifson
• Mechero Bunsen.

Procedimiento

• Flameamos el asa y el cuello del tubo, recogemos inoculo de los tubos inclinados.
• Flameamos el tubo y lo cerramos con el tapón.
• Cogemos el tubo con Hugh – Leifson, tapado con parafina.
• Introducimos el asa en el medio. Lo removemos levemente, para dejar más cantidad de muestra y la sacamos el asa.

• Flameamos el asa y repetimos el mismo proceso con el tubo con Hugh – Leifson sin parafina.

Resultados

Muestra nº13: En el tubo con parafina, hay producción de gases y es de color amarillo-anaranjado homogéneo.

 El tubo que no lleva parafina, es amarillo homogéneo. Hay metabolismo aerobio facultativo.

Muestras nº5, 21 y 8: No hay ni fermentación ni oxidación, por lo que tiene un color verde homogéneo.