IMVIC

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Indol

Fundamento

El indol es un compuesto que se genera mediante la desaminación reductiva de triptófano y estareacción es llevada a cabo por algunas bacterias que poseen las enzimas triptofanasas. Pera detectar la producción de indol, se utiliza el medio de agua peptona y la lectura de la prueba se realiza con el reactivo de Kobacs. En caso de que la prueba de positivo, se debería producir una coloración rosa/rojiza,

Materiales

• Tubos con medio agua peptona.
• Reactivo de Kobacs.

• Asa de siembra.
• Mechero Bunsen.
• Pipeta Pasteur.

Procedimiento

• Sembramos los tubos de agua peptonada con las diferentes muestras y las dejamos en la estufa 24h.
• Tras 24h en la estufa a 37º, cogemos las muestras y les echamos 5 gotas de el reactivo de Kobacs.
• En caso de que la muestra sea positiva, deberá aparecer un halo rojo en la superficie, de no aparecer, el resultado será negativo.

Rojo de metilo

Fundamento

El rojo metilo es un indicado del pH. Actúa entre 4,2  y 6,3, variando de pH = 4,2 (rojo)  a pH = 6,3 (amarillo). Permite determinar la presencia de ácidos que se producen durante la fermentación. La lectura debe de ser a las 48 – 72 h, ya que, transcurrido ese tiempo, todos los ácidos no estables habrán desaparecido y solo quedarán, en la muestra, los ácidos estables.

Materiales

• Tubos con medio Clark y Lubs sembrados.
• Pipeta Pasteur.
• Asa de siembra.
• Mechero Bunsen.
• Muestras.
• Mechero.
• Rojo de metilo. Si las bacterias llevan a cabo la fermentación ácido-mixta.

Procedimiento

• Con el asa de siembra, recogemos un inóculo de muestra y  lo sembramos en uno de los tubos que contenga el medio Clark y Lubs.
• Los ponemos en la estufa a 37º durante 24h
• Pasado ese tiempo, cogemos una de las muestras sembradas y les echamos 5 gotas de rojo de metilo para su comprobacion

• Si en la superficie se forma un halo rojo, el resultado será positivo, de lo contrario, será negativo.

Voges – Proskauer

Fundamento

Esta prueba se utiliza para ver si hay fermentación butanodioica (2-3-butanodiol). El reactivo a utilizar es el de Voges – Proskauer. Esta prueba se compone de dos reactivos, el VPA y el VPB. El primero, es KOH y el segundo es ∝-naftal. Se utiliza el medio de Clark y Lubs.

Materiales

• Reactivo KOH y ∝-naftal.

• Tubos con el medio Clarks y Lubs.
• Muestras.
• Asa de siembra.
• Mechero Busen.
• Mechero.

Procedimiento

• Cogemos un tubo con el medio Clark y Lubs y sembramos la muestra.
• Los metemos a la estufa y los dejamos reposar 24 h a 37º.
• Una vez pasado ese tiempo, los sacamos y, primeramente, le echamos 5 gotas de KOH y, seguidamente, 5 gotas de ∝-naftal.

• Dejamos el tubo abierto hasta que suceda algo.

• El resultado será positivo si hay un desarrollo de color rojo en pocos minutos después de una completa agitación del tubo.
• El resultado será negativo si hay ausencia de color rojo.

Citrato

Fundamento

Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de crecer con citrato como única fuente de carbono y sales amónicas inorgánicas, como única fuente de nitrógeno, provocando la alcanización del medio. El medio a utilizar será el citrato de Simmons, que contiene citrato de sodio, fosfato de amono y azul de bromotimol, como indicador de pH.

Solo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio, los cualesharán que el medio cambie de verde a azul oscuro.

Materiales

• Tubos inclinados con citrato de Simmons.
• Muestras.
• Asa de siembra.
• Mechero Bunsen.
• Mechero.
• Libreta y boli.

Procedimiento

• Cogeremos uno de los tubos inclinados con citrato de Simons, cogeremos un inóculo de la muestra y la sembraremos mediante agotamiento.
• La metemos a la estufa 24h a 37º.
• Sacamos el tubo sembrado y comprobamos resultados.

RESULTADOS GENERALES

1. Indol: tanto para la muestra nº8 como para la nº12, nos salió resultado negativo.
2. Rojo metilo: medio acido, por lo que la prueba dio positivo.
3. Voges-Proskauer: No se pudo determinar el resultado
4. Citrato: negativos