Fundamento
En el medio de cultivo, el agregado de una alta concentración de un determinado hidrato de carbono, hace que los microorganismos utilicen para su desarrollo dicha sustancia, evitando que bacterias aeróbicas utilicen la tripteína presente con la consecuente producción de reacción alcalina, la que se neutraliza por la ligera acidez producida por un microoganismo oxidativo.
El fosfato dipotásico agrega capacidad reguladora, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH que vira al color amarillo en medio ácido. El contenido de agar, da la propiedad de ser un medio semisólido, y permite determinar la movilidad y la distribución de los productos ácidos en el medio de cultivo. La glucosa es el hidrato de carbono mas frecuente que se agrega al medio basal O.F.
Por oxidación o fermentación de un determinado hidrato de carbono, se acidifica el medio y el indicador de pH vira del color verde al amarillo.
Materiales
- Glucosa.
- Medio Hugh-leifson deshidratado.
- Balanza.
- Vidrio de reloj.
- Pipeta.
- Tubos.
- Embudo.
- Agua destilada.
- Pipeta Pasteur.
- Parafina.
Cálculos previos
9,8 g –--------- 1000 ml
x –--------- 300 ml x= 2,94g Hugh-Leifson + 3g de glucosa.
7 ml= tubos pequeños.
10 ml= tubos grandes.
Procedimiento
- Pesamos en la balanza 2,94g de medio Hugh-Leifson.
- Pesamos en la balanza 3g de glucosa.
- Echamos 300 ml de agua destilada en probeta.
- Con cuidado y, como siempre, arrastramos el medio, con el agua destilada, hacia el vaso de precipitado. Y repetimos el mismo proceso con la glucosa.
- Después, con una pipeta vamos echando el medio a los tubos de ensayo, echando una cantidad acorde con el tamaño de estos.
- Una vez esté todo el medio repartido, dejaremos la mitad en un lado y la otra mitad, le vertiremos parafina con una Pipeta Pasteur para que quede una capa fina en la superficie.
- Autoclave para esterilizar.
- Estufa a 37º durante 24 horas.
