Practica 3º: Tinción Vital. Preparacion de Tinciones y extensión de Actimel

Tintes: Safranina/ Fuscina/ Azul de metileno

Fundamento: El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares.

Materiales

• Matraz Aforado 100ml
• Mechero Bunsen
• Asa de siembra
• Portaobjetos y Cubre
• Tubo de ensayo
• Balanza analitica
• Vaso de Precipitados

Reactivos

• Agua Destilada
• Tintes: Safranina (Solido), Fuscina Basica, Azul de metileno
• Suero Fisiologico
• Muestra: Actimel

Procedimiento

1º Preparamos los tintes, comenzando por la Fuscina Basica que es un tinte solido, preparamos una tinción 1/100.000, lo que quiere decir que se necesita 0,1g de Fuscina Basica diluido en 100ml de Agua destilada. Pesamos esos 0,1g de Fuscina Basica en la balanza, en un vaso de precipitados mezclamos el tinte con agua destilada hasta que no quedan grumos. Vertimos la mezcla en un matraz aforado de 100ml. (Es aconsejable a la hora de vertir el tinte no enrasar el matraz de una sola vez y utilizar agua destilada para hacer varios lavados del vaso de precipitados para no perder la mayor cantidad de tinte posible).

- Preparamos la solucion de Azul de metileno 1/1000 y 1/500, son tintes liquidos por lo que para su realización necesitaremos 1ml y 0,5ml de este tinte respectivamente, con una micropipeta vertimos el tinte en un matraz de 100ml y enrasamos con agua destilada.

- Preparamos la solucion de Safranina 1/100, tinte liquido, en el que utilizaremos 0,1ml de este tinte medidos con una micropipeta y enrasamos en un matraz con agua destilada.

Para finalizar rotulamos, los matraces y los tapamos con parafina.

2º Rotulamos portaobjetos con las tinciones que vamos a utilizar en cada uno de ellos. Con una pipeta pasteur colocamos una gota de suero fisiologico. Con un asa de siembra recogemos la muestra de actimel y realizamos un frotis en el portaobjetos utilizando la gota de suero fisiologico como base para la muestra.

3º A continuacion con una pipeta pasteur usamos una gota de nuestros tintes sobre nuestras muestras. Con un cubre sobre la parte del frotis y el tinte, comenzamos la observacion.

- Interpretacion de los Resultados: Se han observado