Practica Descripcoion macroscopica de Colonias

Descripccion macroscopica de Colonias

El desarrollo de colonias sobre las superficies de un agar permite al microbiología identificar las bacterias porque las especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto característicos.

La identificación presuntiva o preliminar de una bacteria se basa en la morfología colonial, para ello se forma en cuenta las siguientes características:

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Tamaño: 

• Mediano 1-2 mm diametro
• Grande 4-6 mm
• Extendidas cesped, Muy grande
• Puntiformes 0.5mm diametro

Transparencia, coloracion o presencia o no de halos de transparencia

Ejemplos de tipos:
Fuente: http://microbitosblog.com/2010/06/14/morfologia-colonial-bacteriana/

Practica 9: Tinción de Esporas

Tinción de Esporas

Fundamento: 
Las esporas son estructuras bacterianas que se forman en condiciones adversas por parte de ciertas bacterias. Tales esporas son capaces de resistir situaciones muy desfavorables, de ahí su dominación de residencia.
En general, las esporas se tiñen muy dificilmente, requiriendo colorantes  con el metodo de Wirtz y Moeller.

Material

• Portaobjetos
• Asa de siembra
• Mechero bunsen o alcohol
• Pipeta Pasteur 
• Cristalizador
• Barras paralelas para tinciones
• Frasco lavador
• Muestra de esporas (Bacillus subtilis en placa, Bacillus en tubo)

Reactivos

• Verde malaquita
• Safranina

Procedimiento:

1. Realizar el frotis a un portaobjetos y fijar con calor
2. Cubrir el portaobjetos con solucion de verde malaquita y calentar hasta la emision de vapores. 5 min
3. Transcurrido este tiempo, lavar con abundante agua destilada tirando el colorante
4. Cubrir la preparación con safranina como contraste. 1 min
5. Lavar con abundante agua secar, rotular y observar en 40x

Resultado:

• Se observa las esporas de color verde debido a la tincion de verde malaquita entre bacterias de color rojo por la safranina
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Practica 7: Siembra de medio de cultivo en placa petri y en tubo.

Resiembra: Tecnica 4 cuadrantes, tecnica por agotamiento y Siembra en tubo

Tecnica de 4 Cuadrantes.

MATERIAL:

• Asa de siembra
• Placa Petri
• Mechero bunsen
• Tubo de ensayo

Muestras que han sido utilizadas

La muestra se toman de medios creados en un medio de caldo de cultivo liquido, con el que la muestra se ha tomado con un hisopo.

-Billete

-Boca

-Piel 

-Movil

-Bater

PROCEDIMIENTO:

1. Colocamos el material en un orden logico
2. Rotulamos una placa petri en 4 partes, escribiendo el numero en la parte superior. 1-2-3-4
3. Flameamos el asa de siembra y recogemos el inoculo con cuidado de no llevarnos el agar
4. Sin hablar abrimos la placa y comenzamos a sembrar

Tecnica de los 3 giros

1. Colocamos el material en un orden logico
2. Realizamos unos pequeños frotes por las esquinas de la placa petri, 1/4
3. Giramos la placa y sin flamear tocamos dos veces con la siembra anterior
4. Seguimos y en el ultimo frote nos vamos metiendo hacia el centro de la placa

Siembra en Tubo con agar inclinado

1. Flameamos en el mechero
2. Recogemos muestra
3. Incubamos en estria desde abajo haciendo zig zag.

Practica 5 Tincion Diferencial de Gram

PRACTICA DE TINCION DIFERENCIAL GRAM

&Objetivos de la practica

• Visualizar diferentes tipos bacterianos en funcion de su distinta composicion de su pared bacteriana
• Visualizar su morfologia y disposicion

Fundamento

Es el metodo mas empleado en bacteriologia gracias al cual las bacterias se pueden clasificar en dos grandes grupos. Este distinto comportamiento en la tincion de Gram es debido a la distinta composicion de la pared de las células bacterianas. De acuerdo con esto, la tincion de gram se va a basar en el empleo de un primer colorante básico, generalmente cristal violeta o violeta de genciana, que teñira de color azul todas las bacterias. Posteriormente, un mordiente, el lugol, aumentara la afinidad del primer colorante a las células, es decir, lo fijara.

Finalmente, un agente decolorante decolorará solamente un tipo de bacterias que seran teñidas con el colorante de contraste. Este distinto comportamiento frente a la decoloración es segundo colorante. Este distinto comportamiento frente a la decoloración es dependiente de la composición de la pared bacteriana, hecho que servira para clasificarlas como Gram + (aquellas que no han sido decoloradas y que por lo tanto quedaran teñidas con el cristal violeta) o como Gram- que seran aquellas bacterias que han sido decoloradas y son teñidas con el colorante de contraste, la safranina.

Materiales

• Portaobjetos
• Asa de siembra
• Mechero bunsen
• Pipeta Pasteur
• Cristalizador
• Barras paralelas
• Frasco lavador
• Muestra problemas (Saliva y Actimel)
• Aceite de inmersion
• Colorantes (Cristal violeta, lugol, Alcohol 96% y safranina)

Procedimiento

1. Comenzamos con la fijacion de las muestras en el porta. Con el mechero bunsen en funcionamiento colocamos una gota de suero en el porta y colocamos la muestra sobre la gota de suero realizando el frotis. Con ayuda del mechero damos pasadas para la fijacion de la muestra en el porta.

      2. A continuacion colocamos los portaobjetos con la muestra ya fijada sobre las barras paralelas que se encontraran encima del cristalizador para recoger los liquidos que caigan. 

3. Comenzamos a aplicar sobre el portaobjetos los colorantes.

-El primer colorante sera cristal violeta, durante 1 min

Lavamos con abundante agua destilada sin dar directamente sobre la muestra.

-Aplicamos el mordiente, el lugol, que actuara fijando el colorante anterior a las bacterias, durante 1 minuto. Se vuelve a lavar el exceso mediante agua destilada. 

-Decoloramos con alcohol durante unos 30 segundos y volvemos a lavar.

-Cubrimos el portaobjetos con el segundo colorante de contraste, Safranina, durante 2 minutos y lavamos 

Secamos las muestras y comenzamos la visualización.

 

Visualización:

Saliva

Actimel

Interpretacion de Resultados: Se aprecian coloraciones rosaceas en las celulas, indicatibo de que estas bacterias corresponden a Gram -